國(guó)產(chǎn)的細(xì)胞培養(yǎng)瓶一般蓋子都是封閉的,不帶內(nèi)墊,常用于密閉培養(yǎng),可保證其密閉性;進(jìn)口的培養(yǎng)瓶的蓋子樣式比較多:密閉蓋、聚酯蓋、透氣蓋、隔墊蓋等。
密閉蓋的性能和國(guó)產(chǎn)的是相同的,聚酯蓋常用于開(kāi)放培養(yǎng),只需輕輕旋松瓶蓋便可保證瓶?jī)?nèi)氣體與環(huán)境中氣體的交換。
透氣蓋是在瓶蓋中加了0.2μm疏水濾膜,提供無(wú)菌氣體交換,減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。
常用于開(kāi)放培養(yǎng),推薦用于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),尤其適用于需要長(zhǎng)期培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)。
隔墊蓋是在隔墊上帶有預(yù)切割口,這樣可以使吸嘴(或者5ml以下規(guī)格的移液管)穿插隔墊進(jìn)行加液、吸液或者收獲細(xì)胞,減少污染的機(jī)會(huì),維持培養(yǎng)瓶封閉無(wú)菌的環(huán)境。
細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后,已基本上飽和,為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng),同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大,就必須進(jìn)行傳代(再培養(yǎng))。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞保存下去的方法。
同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。
懸浮性細(xì)胞直接分瓶就可以,而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
具體操作步驟如下:
將長(zhǎng)滿(mǎn)細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。
隨著時(shí)間的推移,原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí)將胰酶棄去,加入10ml培養(yǎng)液終止消化。
觀察消化也可以用肉眼,當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時(shí)終止消化。
一般室溫消化時(shí)間約為1—3分鐘。
用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分到另外兩到三瓶中,實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞,置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。
第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
以上是細(xì)胞培養(yǎng)瓶在細(xì)胞傳代中的應(yīng)用,消化液的配制方法如下:稱(chēng)取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1:250),加入100ml無(wú)Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,濾器過(guò)濾除菌,4℃保存,用前可在37℃下回溫。
胰酶溶液中也可加入EDTA,使終濃度達(dá)0.02%。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別
培養(yǎng)瓶適合長(zhǎng)期培養(yǎng)、傳代、作為種子細(xì)胞。
不易污染。
培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板適合在各種實(shí)驗(yàn)中選用,臨時(shí)培養(yǎng)。
培養(yǎng)面積T25約為25,T75為75。
6孔板、10/孔。
12孔板4/孔。
培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿的區(qū)別在于,安全系數(shù)的高低、培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量的多少。
個(gè)人感覺(jué)培養(yǎng)瓶的安全系數(shù)更高,操作也比較方便。
培養(yǎng)瓶瓶可以用來(lái)做相對(duì)大規(guī)模的培養(yǎng)或比較容易被污染的細(xì)胞。
而培養(yǎng)皿比較適合小規(guī)模的培養(yǎng)或做一些對(duì)照分析實(shí)驗(yàn)。
培養(yǎng)瓶主要分類(lèi)
按細(xì)胞對(duì)產(chǎn)品的貼壁要求分為三類(lèi):
普通型適合細(xì)胞和組織的懸浮培養(yǎng);
標(biāo)準(zhǔn)型具有良好的細(xì)胞貼壁性能,適用于細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng);
型表面含有含氮官能團(tuán),能促進(jìn)某些細(xì)胞(如細(xì)胞)的貼壁、生長(zhǎng)和分化。
按瓶子外形分為:
寬體培養(yǎng)瓶;
三角培養(yǎng)瓶;
斜頸培養(yǎng)瓶。
細(xì)胞培養(yǎng)瓶特征
厚度均勻,底部無(wú)畸變;
密封蓋/濾膜蓋(0.22μm疏水膜);
設(shè)計(jì)的瓶蓋可快速旋轉(zhuǎn);
側(cè)面可疊放,更有效地利用培養(yǎng)箱;
無(wú)毒,無(wú)DNA/RAN酶;
伽馬射線(xiàn)消毒滅菌。
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