關(guān)鍵詞：N-糖蛋白的糖鏈鑒別及相對含量測定,N糖苷分析 ,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定,蛋白質(zhì)組學(xué),代謝組學(xué),tmt,抗體測序,itraq,蛋白質(zhì)譜鑒定"

糖基化修飾是細胞中zuì普遍的翻譯后修飾方式之一，通過共價結(jié)合糖鏈影響蛋白的結(jié)構(gòu)、活性以及定位等使蛋白具有多種多樣的生物學(xué)功能，參與調(diào)節(jié)不同的生命活動進程。根據(jù)所結(jié)合的糖鏈的類型可以將其分為N-糖基化和O-糖基化。N-糖基化將N-聚糖共價連接到蛋白質(zhì)特殊氨基酸序列的天冬酰胺殘基上，是生物藥物尤其是單克隆抗體上zuì廣為人知的糖基化形式。 N-聚糖結(jié)構(gòu)通過影響藥代動力學(xué)、藥效學(xué)和免疫原性等進一步影響其藥效，是生物制藥產(chǎn)品中的關(guān)鍵質(zhì)量屬性，這使得N-聚糖結(jié)構(gòu)的表征分析成為生物制藥發(fā)展過程中必不可少的部分。

N-糖蛋白糖鏈的鑒定是一項復(fù)雜且充滿挑戰(zhàn)的工作，需要解析的糖鏈結(jié)構(gòu)包括特定位點是否連接有多種不同的糖鏈、各糖基的排列順序、糖基本身異構(gòu)體的構(gòu)型、糖基的環(huán)化形式、糖基相互之間的連接方式以及分支特點等。目前還沒有任何一種技術(shù)能解決所有問題，也不具備規(guī)模化直接分析糖鏈組成結(jié)構(gòu)的技術(shù)條件，常用的解析糖鏈結(jié)構(gòu)的方法有色譜法、串聯(lián)質(zhì)譜法以及核磁共振法等。

相比糖鏈的結(jié)構(gòu)分析，糖鏈的含量鑒定就顯得容易得多。為了確定糖蛋白的平均含糖量或糖基化位點的占有率，可利用MALDI-TOF-MS直接測出糖蛋白的相對分子質(zhì)量，同時利用糖苷內(nèi)切酶切除糖鏈并獲得蛋白質(zhì)部分的相對分子質(zhì)量，利用這兩部分的平均相對分子質(zhì)量進而求得糖蛋白的平均含糖量。此外，還可通過傳統(tǒng)的SDS-聚丙烯電泳和高效液相色譜法進行糖鏈含量的鑒定。

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