檢測技術服務:基于質譜的肽和蛋白質從頭測序--檢測技術服務詳情

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基于質譜的肽和蛋白質從頭測序方法

從頭測序是一種分析和鑒定肽序列和一些翻譯后修飾的蛋白質的方法。與其他一些依賴于已知的蛋白質序列數(shù)據(jù)庫或已知的質譜數(shù)據(jù)庫的分析方法不同，從頭測序利用串聯(lián)質譜根據(jù)肽段的裂解特性直接進行分析。因此，未包括在蛋白質數(shù)據(jù)庫中的肽序列、新物種的蛋白質序列和基因組未被測序的蛋白質序列都可以進行從頭測序。采用該方法開發(fā)的軟件有PepNovo、PEAKS、pNovo。

基于質譜的肽和蛋白質從頭測序基本原理

在質譜分析中，待分析物質的粒子在通過電磁場之前首先被電離。由于不同質荷比的離子在電磁場中受到的作用力不同，其運動軌跡和飛行時間等分離檢測離子的特征也不同。找到特定的裂解模式后，根據(jù)質譜峰之間的質量差和氨基酸的翻譯后修飾情況，可以計算出相應的氨基酸信息。

基于質譜的肽和蛋白質從頭測序工作流程

蛋白質/肽從頭測序的工作流程如下：

首先利用生化分離或親和選擇過程從樣品組織中提取待分析的蛋白質。然后將該蛋白質用相關的酶（如胰蛋白酶）酶解成肽段；
使用高效液相色譜分離和純化肽消化產(chǎn)物；
在進入離子源之前，再利用高壓液相色譜分離和洗滌肽；
肽通過離子源并轉化為帶高電荷的液滴。 脫水后進入質譜儀生成一級質譜；
計算機生成肽的優(yōu)先級列表；
該多肽被選擇用于下一輪的碎裂。通過串聯(lián)質譜檢測離子在電磁場中的運動可得到離子的質荷比；
在質譜儀分析過程中，具有特定質量電荷比的多肽離子代表一定的質量；

基于質譜的肽和蛋白質從頭測序方法應用

該技術可用于生物樣品中未知多肽序列的分析和檢測、末端殘基缺失的多肽的檢測、賴氨酸和亮氨酸的鑒定、N端封閉和環(huán)狀蛋白質的鑒定、未知蛋白質或多肽序列信息的準確測定、商業(yè)修飾的蛋白質和酶序列的準確測定、穩(wěn)定細胞系表達的蛋白質序列的準確測定以及抗體一級結構序列的克隆分析等。

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